將制備的1:10樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)8 h~18 h

用無菌吸管吸取1:10樣品勻液1 mL，注入含有9 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管內(nèi)，振搖 試管混勻，制備1:100的樣品勻液。

另取1 mL無菌吸管，按5.2.2.1操作程序，依次制備10倍系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋一次，換用一支1 mL無菌吸管。

根據(jù)對(duì)檢樣污染情況的估計(jì)，選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3支含有9 mL 3% 氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1 mL置36℃±1℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)8 h〜18 h

對(duì)所有顯示生長(zhǎng)的增菌液，用接種環(huán)在距離液面以下1 cm內(nèi)沾取一環(huán)增菌液，于TCBS平板或 弧菌顯色培養(yǎng)基平板上劃線分離。一支試管劃線一塊平板。于36±1℃培養(yǎng)18 h〜24 h

典型的副溶血性弧菌在TCBS上呈圓形、半透明、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類似 口香糖的質(zhì)感，直徑2 mm〜3 mm。從培養(yǎng)箱取出TCBS平板后，應(yīng)盡快（不超過1 h)挑取菌落或標(biāo)記 要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養(yǎng)基上的特征按照產(chǎn)品說明進(jìn)行判定。

挑取3個(gè)或以上可疑菌落，劃線接種3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板，36℃±1℃培養(yǎng)18 h〜24h

氧化酶試驗(yàn)：挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，副溶血性弧菌為氧化酶陽性。

涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈

棒狀、弧狀、卵圓狀等多形態(tài)，無芽胞，有鞭毛。

挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層，36℃±1℃培養(yǎng)24 h 觀察結(jié)果。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變 或紅色加深，有動(dòng)力。

嗜鹽性試驗(yàn)：挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，分別接種0%、6%、8%和10%不同氯化鈉濃度的胰 胨水，36℃±1℃培養(yǎng)24 h，觀察液體混濁情況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不 生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，在6%氯化鈉和8%氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。

取純培養(yǎng)物分別接種含3%氯化鈉的甘露醇試驗(yàn)培養(yǎng)基、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基、MR-VP培養(yǎng)基， 36℃±1℃培養(yǎng)24 h~48 h后觀察結(jié)果；3%氯化鈉三糖鐵瓊脂隔夜培養(yǎng)物進(jìn)行ONPG試驗(yàn)可選擇生化 鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)。