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苯酚法測定可溶性糖

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2013-07-24  來源:實驗室資訊網(wǎng)
核心提示:【原理】植物體內(nèi)的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是:糖在濃硫酸作用下,脫水生成的糠
 【原理】

植物體內(nèi)的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖。苯酚法測定可溶性糖的原理是:糖在濃硫酸作用下,脫水生成的糠醛或羥甲基糠醛能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物,在10~100μg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比,且在485nm波長下有最大吸收峰,故可用比色法在此波長下測定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測定,方法簡單,靈敏度高,基本不受蛋白質(zhì)存在的影響,并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上。

【儀器 與用具】

分光光度計;電爐;鋁鍋;20ml刻度試管;刻度吸管5ml 1支,1ml 2支;記號筆;吸水紙適量。

【試劑 】

1.90%苯酚溶液 稱取90g苯酚(AR),加蒸餾水10ml溶解,在室溫下可保存數(shù)月;

2.9%苯酚溶液 取3ml 90%苯酚溶液,加蒸餾水至30ml,現(xiàn)配現(xiàn)用;

3.濃硫酸(比重1.84);

4.1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 將分析純蔗糖在80℃下烘至恒重,精確稱取1.000g。加少量水溶解,移入100ml容量瓶中,加入0.5ml濃硫酸,用蒸餾水定容至刻度;

5.100μg/ml蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 精確吸取1%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液1ml加入100ml容量瓶中,加水定容。

【方法】

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取20ml刻度試管 11支,從0~10分別編號,按表24-1加入溶液和水。

表24-1 各試管 加溶液和水的量

 

管 號

0

1~2

3~4

5~6

7~8

9~10

100μg/ml蔗糖液(ml)

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

水(ml)

2.0

1.8

1.6

1.4

1.2

1.0

蔗糖量(μg)

0

20

40

60

80

100

 

然后按順序向試管內(nèi)加入1ml 9%苯酚溶液,搖勻,再從管液正面快速加入5ml濃硫酸,搖勻。比色液總體積為8ml,在恒溫下放置30min,顯色。然后以空白為參比,在485nm波長下比色測定,以糖含量為橫坐標(biāo),光密為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,求出標(biāo)準(zhǔn)直線方程。

2.可溶性糖的提取

取新鮮植物葉片,擦凈表面污物,剪碎混勻,稱取0.10~0.30g,共3份,或干材料。分別放入3支刻度試管中,加入5~10ml蒸餾 水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液過濾入25ml容量瓶中,反復(fù)沖洗試管及殘渣,定容至刻度。

3.測定 吸取0.5ml樣品液于試管中(重復(fù)2次),加蒸餾 水1.5ml,同制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的步驟,按順序分別加入苯酚,濃硫酸溶液,顯色并測定光密度。由標(biāo)準(zhǔn)線性方程求出糖的量,按下式計算測試樣品中糖含量。

可溶性糖含量(mg/g)= [C×(V/a)×n]/(W×103 )

式中 C-標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖量(μg);

a-吸取樣品液體積(ml);

V-提取液量(ml);

n -稀釋倍數(shù);

W-組織重量(g)。

編輯:songjiajie2010

 
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關(guān)鍵詞: 苯酚法 可溶性糖
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