本方法適用于大豆及其制品中大豆總皂苷的測(cè)定（在測(cè)定前樣品需前處理）。
1. 方法提要
分光光度法測(cè)定大豆總皂苷含量的新方法，以齊墩果酸作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度法，配合薄層分析結(jié)果測(cè)定了經(jīng)大孔樹脂吸附法、正丁醇再分配法和混合法精制純化后的三種大豆總皂苷樣品含量。
2. 儀器
（1）721分光光度儀：上海第三分析儀器廠。
（2）電熱恒溫水浴鍋：北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠。
3. 試劑
（1）齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品（含量為99.999%）：中國(guó)藥品生物制品檢定所。
（2）人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品（含量為99.999%）：中國(guó)藥品生物制品檢定所。
（3）大豆皂苷Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)品：日本靜崗縣立大學(xué)富田薰教授惠贈(zèng)。
（4）CMC及硅膠G（薄層層析用）：青島海洋化工集團(tuán)生產(chǎn)。
（5）顯色劑：氯仿+甲醇+水（65+35+10）混勻靜置取上層。
（6）氯仿及甲醇（分析純）：上海化工廠生產(chǎn)。
（7）98%濃硫酸：哈爾濱化工廠生產(chǎn)，稀釋成10%溶液待用。
（8）高氯酸。
（9）冰醋酸。
（10）5%香草醛－冰醋酸溶液。
（11）齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品27.60mg，加甲醇溶解，定容至100mL，得濃度為0.276μg/μL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。（標(biāo)明小數(shù)點(diǎn)后2位由分析天平精度決定）。
4. 測(cè)定步驟
（1）樣品處理：
樣品1：為豆粕乙醇提取物經(jīng)大孔樹脂吸附法純化的大豆總皂苷制得物，棕
黃色粉末。
樣品2：為豆粕乙醇提取物經(jīng)正丁醇再分配法純化制得的大豆總皂苷提取
物，黃色粉末。
樣品3：為將樣品2按樣品1的方法時(shí)一步純化處理的大豆總皂苷制得物，
為淺黃色片狀結(jié)晶。
準(zhǔn)確稱取樣品1、樣品2及樣品3，分別為31.2、26.6、27.2mg，以甲醇溶解后分別定容于100mL容量瓶中，即得濃度分別為0.312、0.266、272μg/μL的樣品溶液。
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：準(zhǔn)確吸取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100、200、300、400、500、600μL于具塞試管中，70℃水浴上蒸干，于每個(gè)試管中加新配制的5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL、高氯酸0.8mL，置60℃水浴上加熱15min，流水冷卻，加冰醋酸5mL，搖勻，以分光光度計(jì)560nm波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度值A(chǔ)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖并將結(jié)果做統(tǒng)計(jì)分析得到回歸方程。
（3）樣品中大豆總皂苷含量的測(cè)定：
a. 樣品的薄層色譜分析：把提取的樣品溶液，人參皂苷的90%醇提取物的甲醇溶液及劑墩果酸標(biāo)準(zhǔn)液點(diǎn)于CMC-硅膠G（0.3%）薄層板上，進(jìn)行分析。展開劑CH3Cl3+CH3OH+H2O（65+35+10），顯色劑：10%的硫酸溶液，110℃加熱10min。
b. 大豆皂苷與劑墩果酸量比換算系數(shù)的推算：
樣品的測(cè)定：吸取300μL樣品1，樣品2和樣品3溶液，按4.(2)項(xiàng)下進(jìn)行操作，測(cè)得A值，每個(gè)樣品各取3份測(cè)定。
（4）精密度試驗(yàn)：連續(xù)測(cè)定劑墩果酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液200μL，方法同上，共5次，得出相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）。
（5）回收率試驗(yàn)：準(zhǔn)確吸取樣品1溶液200μL于3只具塞試管上，加入準(zhǔn)確吸取的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液100μL，按4.(2)項(xiàng)下操作，測(cè)得在560nm波長(zhǎng)處的吸光度A值；同時(shí)做樣品1的300μL、400μL各3份，同上操作；計(jì)算回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD。
5. 結(jié)果計(jì)算
略