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一、葡萄嫩梢采集與消毒
將大樹或扦插苗長(zhǎng)出5—7片葉的嫩梢，取5—10厘米長(zhǎng)，去掉幼葉。用自來水沖洗3—5分鐘，在70％酒精中浸泡30—40秒鐘，用蒸餾水沖洗2—3次，再放入0.5％氯化汞溶液中消毒7一10分鐘，最后用無菌水沖洗5—6次后備用。
二、培養(yǎng)基制作與篩選
(一)莖尖培養(yǎng) 方1 1／2ms培養(yǎng)基+6—芐基嘌呤(6—ba)0.5一lppm個(gè)荼乙酸(naa)0.01ppm+水解乳蛋白(lh)100ppm+蔗糖2％+瓊脂0.6％配制，氫離子濃度調(diào)到1585納摩／升[ph5.8)。在98.06千帕的壓力下，高壓滅菌20分鐘，冷涼待用。山東釀酒葡萄研究所用此方對(duì)白羽、紅香蕉、白友誼、雷司令等品種莖尖培養(yǎng)成活率達(dá)83.5％以上。
方2 1／2ms培養(yǎng)基+赤霉素(ga)0.1ppm+吲哚乙酸(1ba)0.59pm+6-節(jié)基嘻吟lppm+激動(dòng)素(kt)0.5ppm+硫酸腺嘌呤(ade)4ppm+瓊脂0.6％+蔗糖0.2％的培養(yǎng)基，對(duì)康拜爾芽變(康太)成活較好(遼寧省農(nóng)科院植保所)。
(二)莖葉分化培養(yǎng) 方1 1／2ms培養(yǎng)基+赤霉素1ppm+吲哚丁酸0.5ppm+6-節(jié)基膘吟1ppm+蔗糖2％+瓊脂0.6％，氫離子濃度調(diào)到1000納摩／升(ph6.0)。在98.06千帕高壓下滅菌20分鐘后備用。遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所對(duì)貝達(dá)、紅富土、黑奧林、巨峰品種族種成活率達(dá)90％以上。
方2 用b5大量元素培養(yǎng)基+ms培養(yǎng)基其他元素+吲哚乙酸(1aa)0.01—0.1ppm+6-芐基嘌呤0.02—0.59pm+腺嘌呤(a)2；ppm或水解乳蛋白1000ppm+蔗糖2％—3％+瓊脂0.7％，氫離子濃度630.9—1585納摩／升(ph5.8—6.2)，配好后裝入三角瓶中，用兩層硫酸紙封口，在98.06—117.67千帕的高壓鍋中滅菌20分鐘，冷涼待用。河南省園藝所用此配方對(duì)京早晶品種接種成活效果較好。
(三)幼根分化培養(yǎng) 方1 用bs大量元素培養(yǎng)基+蔗糖4％+吲哚乙酸1ppm+6-芐基嘌呤0.08ppm+瓊脂7％，氫離子濃度1000納摩／升(ph6)，經(jīng)高壓滅菌20分鐘，冷涼備用。遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所用此配方對(duì)紅富士、黑奧林、巨峰等品種莖尖培養(yǎng)的單芽段，插入滅菌后的三角瓶培養(yǎng)基中，芽痕高于培養(yǎng)基面3.5毫米，每瓶插入1—3個(gè)莖段，插后在黑暗中培養(yǎng)48小時(shí)；再轉(zhuǎn)入間歇光照(兩支40瓦日光燈下，每天光照10小時(shí))培養(yǎng)，溫度保持在23—28℃，20天后幼根平均長(zhǎng)分別為99.0，86.3，78.0毫米。
方2 用1／2ms培養(yǎng)基+蔗糖4％+吲哚乙酸0.4ppm+6-芐基嘌呤0.06ppm+瓊脂7％，氫離子濃度1000納摩／升(ph6)，經(jīng)過高壓滅菌后接種貝達(dá)、紅宮土、黑奧林、臣蜂，20天后幼根平均長(zhǎng)分別為94.0，36.5，16.8，50.8毫米。此培養(yǎng)基對(duì)貝達(dá)繁殖有較好效果(遼寧省農(nóng)科院植保所)。
三、接種(莖段試管培養(yǎng)) 在超凈工作臺(tái)上，將徹底消毒過的備用嫩枝剪截2厘米核的單芽莖段，將其下部插入滅菌后的試管培養(yǎng)基中，芽痕高于培養(yǎng)基面3—5毫米，每管插1—3個(gè)莖段，在黑暗處培養(yǎng)48小時(shí)，再轉(zhuǎn)入間歇光照(兩支40瓦日光燈下，每天照10個(gè)小時(shí))培養(yǎng)，溫度保持在25—28℃，以后光照時(shí)間每天可延長(zhǎng)12—14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000—2500勒。
四、繼代培養(yǎng) 將試管苗剪成帶葉單芽段，不必消毒，插人培養(yǎng)基中，一般10一15天開始生根，30—35天可長(zhǎng)成5.6片葉的小苗，在適宜條件下，1年可繁殖數(shù)萬株試管苗。
五、煉苗移栽 試管苗長(zhǎng)成后移到溫室或塑料大繃?yán)铮谧匀还庹障聼捗纭Ｒ鬁囟仍?0—25℃，經(jīng)兩周后將試管塞揭開，使之接受自然光照、溫度、濕度鍛煉4—5天。用鑷子夾葉柄將小苗從培養(yǎng)基中取出，洗去培養(yǎng)基殘留物，直接栽入溫室或大棚中的小拱棚里的砂壤土或粗砂里，澆透底水。棚內(nèi)濕度保持在90％左右。10厘米下的地溫應(yīng)穩(wěn)定在15℃左右，光照為4000—5000勒。15—20天后見幼葉變綠時(shí)，即可移植到大田，成活率達(dá)80％以上。如棚內(nèi)溫度過高，要通風(fēng)和蓋葦簾遮蔭降溫，噴灑涼水，提高棚內(nèi)空氣濕度和土壤濕度，以保持煉壯苗的適宜條件。
將大樹或扦插苗長(zhǎng)出5—7片葉的嫩梢，取5—10厘米長(zhǎng)，去掉幼葉。用自來水沖洗3—5分鐘，在70％酒精中浸泡30—40秒鐘，用蒸餾水沖洗2—3次，再放入0.5％氯化汞溶液中消毒7一10分鐘，最后用無菌水沖洗5—6次后備用。
二、培養(yǎng)基制作與篩選
(一)莖尖培養(yǎng) 方1 1／2ms培養(yǎng)基+6—芐基嘌呤(6—ba)0.5一lppm個(gè)荼乙酸(naa)0.01ppm+水解乳蛋白(lh)100ppm+蔗糖2％+瓊脂0.6％配制，氫離子濃度調(diào)到1585納摩／升[ph5.8)。在98.06千帕的壓力下，高壓滅菌20分鐘，冷涼待用。山東釀酒葡萄研究所用此方對(duì)白羽、紅香蕉、白友誼、雷司令等品種莖尖培養(yǎng)成活率達(dá)83.5％以上。
方2 1／2ms培養(yǎng)基+赤霉素(ga)0.1ppm+吲哚乙酸(1ba)0.59pm+6-節(jié)基嘻吟lppm+激動(dòng)素(kt)0.5ppm+硫酸腺嘌呤(ade)4ppm+瓊脂0.6％+蔗糖0.2％的培養(yǎng)基，對(duì)康拜爾芽變(康太)成活較好(遼寧省農(nóng)科院植保所)。
(二)莖葉分化培養(yǎng) 方1 1／2ms培養(yǎng)基+赤霉素1ppm+吲哚丁酸0.5ppm+6-節(jié)基膘吟1ppm+蔗糖2％+瓊脂0.6％，氫離子濃度調(diào)到1000納摩／升(ph6.0)。在98.06千帕高壓下滅菌20分鐘后備用。遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所對(duì)貝達(dá)、紅富土、黑奧林、巨峰品種族種成活率達(dá)90％以上。
方2 用b5大量元素培養(yǎng)基+ms培養(yǎng)基其他元素+吲哚乙酸(1aa)0.01—0.1ppm+6-芐基嘌呤0.02—0.59pm+腺嘌呤(a)2；ppm或水解乳蛋白1000ppm+蔗糖2％—3％+瓊脂0.7％，氫離子濃度630.9—1585納摩／升(ph5.8—6.2)，配好后裝入三角瓶中，用兩層硫酸紙封口，在98.06—117.67千帕的高壓鍋中滅菌20分鐘，冷涼待用。河南省園藝所用此配方對(duì)京早晶品種接種成活效果較好。
(三)幼根分化培養(yǎng) 方1 用bs大量元素培養(yǎng)基+蔗糖4％+吲哚乙酸1ppm+6-芐基嘌呤0.08ppm+瓊脂7％，氫離子濃度1000納摩／升(ph6)，經(jīng)高壓滅菌20分鐘，冷涼備用。遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植保所用此配方對(duì)紅富士、黑奧林、巨峰等品種莖尖培養(yǎng)的單芽段，插入滅菌后的三角瓶培養(yǎng)基中，芽痕高于培養(yǎng)基面3.5毫米，每瓶插入1—3個(gè)莖段，插后在黑暗中培養(yǎng)48小時(shí)；再轉(zhuǎn)入間歇光照(兩支40瓦日光燈下，每天光照10小時(shí))培養(yǎng)，溫度保持在23—28℃，20天后幼根平均長(zhǎng)分別為99.0，86.3，78.0毫米。
方2 用1／2ms培養(yǎng)基+蔗糖4％+吲哚乙酸0.4ppm+6-芐基嘌呤0.06ppm+瓊脂7％，氫離子濃度1000納摩／升(ph6)，經(jīng)過高壓滅菌后接種貝達(dá)、紅宮土、黑奧林、臣蜂，20天后幼根平均長(zhǎng)分別為94.0，36.5，16.8，50.8毫米。此培養(yǎng)基對(duì)貝達(dá)繁殖有較好效果(遼寧省農(nóng)科院植保所)。
三、接種(莖段試管培養(yǎng)) 在超凈工作臺(tái)上，將徹底消毒過的備用嫩枝剪截2厘米核的單芽莖段，將其下部插入滅菌后的試管培養(yǎng)基中，芽痕高于培養(yǎng)基面3—5毫米，每管插1—3個(gè)莖段，在黑暗處培養(yǎng)48小時(shí)，再轉(zhuǎn)入間歇光照(兩支40瓦日光燈下，每天照10個(gè)小時(shí))培養(yǎng)，溫度保持在25—28℃，以后光照時(shí)間每天可延長(zhǎng)12—14小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000—2500勒。
四、繼代培養(yǎng) 將試管苗剪成帶葉單芽段，不必消毒，插人培養(yǎng)基中，一般10一15天開始生根，30—35天可長(zhǎng)成5.6片葉的小苗，在適宜條件下，1年可繁殖數(shù)萬株試管苗。
五、煉苗移栽 試管苗長(zhǎng)成后移到溫室或塑料大繃?yán)铮谧匀还庹障聼捗纭Ｒ鬁囟仍?0—25℃，經(jīng)兩周后將試管塞揭開，使之接受自然光照、溫度、濕度鍛煉4—5天。用鑷子夾葉柄將小苗從培養(yǎng)基中取出，洗去培養(yǎng)基殘留物，直接栽入溫室或大棚中的小拱棚里的砂壤土或粗砂里，澆透底水。棚內(nèi)濕度保持在90％左右。10厘米下的地溫應(yīng)穩(wěn)定在15℃左右，光照為4000—5000勒。15—20天后見幼葉變綠時(shí)，即可移植到大田，成活率達(dá)80％以上。如棚內(nèi)溫度過高，要通風(fēng)和蓋葦簾遮蔭降溫，噴灑涼水，提高棚內(nèi)空氣濕度和土壤濕度，以保持煉壯苗的適宜條件。
