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腹水型腫瘤懸液的制備

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-27

1 抽取腹水
  選擇接種后7-10d健康較好的動物,頸椎脫臼,固定于蠟板上,腹部皮膚消毒后,剪開并剝去腹部皮膚,用空針穿過腹部肌肉,抽吸腹水,放入無菌容器內,置冰塊保存。若用幾只動物供瘤時,應將腹水混合。另取小量腹水,置于加有肝素的干試管內,作為觀察細胞形態及細胞計數用。將空針中剩余的腹水,滴一滴于載玻片上,推片,瑞氏染色,鏡下進行細胞分類計數,其中瘤細胞數應≥95%。
  抽出之腹水應為乳白色之濃稠液體,若為黃色或有大量紅細胞數應棄去。
  2 細胞計數
  取置于肝素管內的細胞。用生理鹽水稀釋10倍及100倍;取稀釋液0.9mL,加臺盼藍(0.2%臺盼藍生理鹽水液)0.1mL,混勻。用白細胞計數法計瘤細胞總數。同時計算受感染的死細胞數。因瘤細胞死后,細胞膜的通透性改變,細胞可被臺盼藍染成藍色。
  3 接種
  腹水用無菌含葡萄糖的平衡鹽水(如Hanks氏液、Gey氏液、洛氏液、Earle氏液等)稀釋至適當的濃度,作腹腔注射,每鼠注入0.1-0.2mL。整個操作應在60min內完成。
  一般在試驗結束后次日稱體重,逐日記錄。對照組動物通常在2-3周內全部死光,個別存活時間太長者需剔除,但各組亦應相應地剔除一只。如試驗期間對照組動物于7d內死亡≥20%,表示試驗失敗。如對照組內20%動物存活4周以上,實驗亦應作廢,受試物組觀察時間一般為60d(生存超過此時限者,仍按60d計算)。分別記錄對照組和受試物組的平均生存時間。  
白血病株的接種腹水型白血病如L1210及P388的接種同腹水型腫瘤接種法。L615小白鼠白血病的接種則按下述方法進行。取L615白血病小白鼠(約接種后第6d),頸椎脫臼,在無菌條件下,剪取脾臟一小塊(約米粒大小),放置玻璃組織勻漿器內,加少量無菌生理鹽水,制成細胞懸液,并稀釋至8-9mL,取一定量加0.2%臺盼藍緩沖液,計每毫升懸液的活細胞數(臺盼藍終濃度為0.02%)。根據活細胞數值適當稀釋懸液將細胞數調整至4×107/mL,接種于小鼠皮下,每鼠接種細胞懸液0.1-0.2mL。

 

 
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