原理

抗原在含有抗體的凝膠中進(jìn)行電泳，在電場作用下，抗原向一個(gè)方向移動(dòng)，在移動(dòng)的過程中，逐步與凝膠中的抗體結(jié)合而沉淀呈火箭狀。沉淀峰面積越大，說明抗原量越多，二者呈正相關(guān)，因此可用于抗原的定量測定。此法具有敏感性高、快速等優(yōu)點(diǎn)。

材料與試劑

1．0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液配成2％的瓊脂。

2．抗原與抗體

3．其它材料同免疫電泳。

操作方法

1．將2％瓊脂煮沸溶化后，放入60℃水浴箱中。

2．將適量的抗體用0.05mol/L pH8.6巴比妥緩沖液稀釋至瓊脂同樣的體積量，放入60℃水浴。

3．將兩者充分混合，立即倒成平板。

4．瓊脂板冷卻后在一側(cè)打孔，孔徑3mm，孔距6mm。

5．于孔內(nèi)分別加入不同濃度的定量抗原。

6．電泳 孔端接負(fù)板。電流強(qiáng)度3mA/cm（或電壓10V/cm），電泳時(shí)間2h~10h。

7．停止電泳，將瓊脂板于生理鹽水中浸泡24h，中間換液數(shù)次。

8．染色、脫色、干燥同免疫電泳。

9．抗體最適量的測定 將已知抗原與抗體以不同濃度梯度進(jìn)行方陣試驗(yàn)，找出所形成的火箭狀沉淀線，輪廓清晰，前端尖窄而閉合的抗體最小量作為抗體的最適用量。

10．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 以抗體的最適用量制成瓊脂板，分別用已知的不同濃度抗原（同一濃度的也必須做一批，以求平均值）進(jìn)行電泳，泳畢后染色，測其沉淀峰的高度（或面積），然后以抗原量為縱軸，沉淀峰高度（或面積）為橫軸，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

11．對照組的設(shè)置 在測未知抗原的同時(shí)，必須設(shè)置已知標(biāo)準(zhǔn)抗原作為電泳對照。

結(jié)果判定

在已知標(biāo)準(zhǔn)抗原所形成的沉淀峰的高度，在許可的誤差范圍內(nèi)，測其待測抗原所形成的沉淀峰的高度（或面積），然后從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出它們相應(yīng)的抗原含量。

注意事項(xiàng)

1．抗原抗體的用量應(yīng)當(dāng)預(yù)試，抗原太濃，在一定時(shí)間內(nèi)不能達(dá)到最高峰，抗體太濃，則沉淀峰太低而無法測量。預(yù)試峰的合適高度為2cm~5cm。

2．用優(yōu)質(zhì)瓊脂糖。

3．一定條件下，電泳時(shí)間要根據(jù)峰的形成情況而定。如形成尖角峰形，表示已無游離抗原。如呈鈍圓形，前面有云霧狀，表示還未到終點(diǎn)。

4．把瓊脂板置于電泳槽上搭好橋，再加抗原，或啟動(dòng)電源后，電壓極低時(shí)加樣，以免造成基部過寬的峰型。