亦稱游離細胞培養（free cell culfure）。是指酵母菌、細菌等單細胞生物的培養，或取多細胞生物體上的一個細胞的無菌培養。從多細胞生物中得到單細胞的辦法是，開始對切離的組織的初始培養物（Primary culture）進行振蕩培養，然后在連續培養中用適當的篩孔將游離的細胞分篩出來，再將收集起來的游離的單細胞懸浮在液體培養基中，最后用微量吸管吸取一個細胞。動物細胞的單細胞培養時，要適當稀釋接種，為使得到的單細胞進行增殖，可以采用微量培養法和保護培養法，對浮游的單細胞群進行平面培養。單細胞培養物的目的，在于可以得到來自單個細胞的細胞群的無性繁殖系（clone）（無性繁殖系化）。