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BIOXL高致病性豬藍耳病一步法凝膠RT-PCR診斷試劑盒說明書

放大字體  縮小字體 發布日期:2009-03-04
核心提示:(針對中國豬藍耳病變異株檢測) 一,產品簡介 一步法突變型豬生殖與呼吸綜合癥病毒反轉錄PCR 檢測臨床樣本和環境樣本 包括48 個擴增反應所需的試劑48次/盒 請在使用前通讀操作手冊 二. 試劑盒組成 25 管 擴增反應試劑球 (Reagent Sphere; 4oC 保存) 2 x 520 l PRRSV


(針對中國豬藍耳病變異株檢測)
一,產品簡介
一步法突變型豬生殖與呼吸綜合癥病毒反轉錄PCR
檢測臨床樣本和環境樣本
包括48 個擴增反應所需的試劑48次/盒
請在使用前通讀操作手冊

二. 試劑盒組成
■ 25 管 擴增反應試劑球 (Reagent Sphere; 4oC 保存)
■ 2 x 520 μl PRRSV 擴增反應試劑球溶液 (Sphere Diluent; -20oC 保存)
■ 2 x 25 μl 陽性對照 (Positive control; -20oC 保存)

三,保存條件
試劑球需置干燥劑中保存在4oC,已融解的試劑球則需保存在零下20oC。其它試劑亦需保存在零下20oC。使用前在冰上溶解各試劑并充分混合,不要旋渦振蕩含酶的擴增反應試劑。

四. 操作程序
擴增反應試劑的準備
1. 計算所需的反應數量 (n)
2. 需要溶解的試劑球 = 0.5 x n
3. 每個試劑球需要 40 μl 試劑球溶液
4. 在冰上溶解試劑,并輕輕扣擊充分混合 (不要旋渦振蕩含酶的試劑)
反應的準備
1. 實驗中除從樣本中獲得的RNA 模板外,我們還建議設置陽性和陰性(水)對照
2. 按照下表準備擴增反應試劑:
反應組分 每個反應體積
擴增反應試劑 20 μl
樣品RNA 5 μl
總體積 25 μl
注意:
■ 實驗時 RNA 應放在冰上
■ 陽性對照建議加5 μl 試劑盒提供的陽性對照。
■ 建議PCR 過程中檢測樣本設置重復,以便得到可靠的實驗結果
■ 為了驗證陰性實驗結果不是由于樣本中存有PCR 抑制物而導致PCR 呈陰性反應,我們建議在測試樣本中加1 μl 的陽性對照作為spiking 對照 (spiking control),同時進行PCR 反應。
PCR 循環:
1 個循環 42oC 30 分鐘
95oC 10 分鐘
40 個循環 95oC 30 秒
53oC 45 秒
72oC 30 秒

五. 實驗數據分析
PCR 的產物需要通過2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。野生型PCR 產物的長度為330 b.p.相對于變種型PCR 產物的長度為240 b.p.
Spiking 對照
陰性的實驗結果有幾個可能性:
1. 樣本中不存在目的片段;
2. 樣本中目的片段的量低于檢測值;
3. 樣本中存有 PCR 抑制物。試劑盒中設計spiking 對照 (spiking control) 是為了確定沒有發生PCR 抑制。
如果樣本中加了陽性對照以后得出陰性結果,說明樣本中存在PCR 抑制物,那幺此次陰性的實驗結果就不能作為正確的結果,需要重新開始樣本核酸的提取和PCR 擴增。

    北京祥龍環宇生物技術有限公司
    北京市朝陽區朝陽路財滿街財經中心9號樓1單元702室 郵編100025
    電話 010-65567512   傳真010-65563420

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