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核酸電泳的指示劑與染色劑

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2005-11-18
 

指示劑
    核酸電泳常用的指示劑有溴酚蘭和二甲苯青及銀染色.溴酚蘭在堿性液體中 呈紫蘭色,在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中,溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈蘭色,它在 1%和1.4%瓊脂糖中電泳時(shí),其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似.
  指示劑一般與蔗糖、甘油或聚蔗糖400組成載樣緩沖液.載樣緩沖液的作用有①增加樣 品密度,使其比重增加,以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi).②在電泳中形成肉眼可見的指 示帶,可預(yù)測(cè)核酸電泳的速度和位置.③使樣品呈色,使加樣操作更方便.

染色劑
    核酸電泳后,需經(jīng)染色后才能顯現(xiàn)出帶型,最常用的是溴化乙錠染色法,其 次是銀染色.
  溴化乙錠(ethidium bromide,EB)是一種熒光染料,EB分子可嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì) 之間,在紫外線激發(fā)下,發(fā)出紅色熒光.根據(jù)情況可在凝膠電泳液中加入終濃度為 0.5ug/ml的EB,有時(shí)亦可在電泳后,將凝膠浸入該濃度的溶液中染色10~15min.瓊脂 糖凝膠EB染色,肉眼可見核酸電泳帶,其DNA量一般>5ng,當(dāng)溴化乙錠太多,凝膠染 色過深,核酸電泳帶看不清時(shí),可將凝膠放入蒸餾水浸泡30min后再觀察.
  銀染色液中的銀離子(Ag+)可與核酸形成穩(wěn)定的復(fù)合物,然后用還原劑如甲醛 使Ag+還原成銀顆粒,可把核酸電泳帶染色黑褐色.主要用于聚丙烯酰胺凝膠電泳染色. 也用于瓊脂糖凝膠染色.其靈敏度比EB高200倍.但銀染色后,DNA不宜回收.

 
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