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基因克隆的方法策略選擇原則

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01

類型I已知基因的序列
(1)已知DNA序列,包括三種情況,一是已知目的基因的DNA全部或部分DNA序列(與題目要求略有出入);二是已知其它物種的同類基因的DNA序列(功能可能已知,與題目要求略有出入);三是已知目的基因cDNA全部或部分序列(屬于題目要求已達到的類型)。
(2)已知目的基因表達產物蛋白等序列。
在這兩種情況下一般采用PCR技術或探針分子雜交技術分離克隆目的基因。

類型II已有基因圖位或標記,轉座子等條件,分別可采用轉座子標簽法、T-DNA標簽法及圖位克隆技術進行分離克隆目的基因。


類型III為止目的基因序列
(1)差異表達序列,即目的基因表達具有組織、器官等時空差異性。可以采用隨機引物多態性擴增技術,定向引物擴增技術和DDRT-PCR、SSH-PCR、RAP-PCR、DNA-RDA、cDNA捕捉法等進行克隆。
(2)無差異表達的目的基因,可采用文庫篩選法、功能蛋白分離法即直接測須發等進行,是難度較大較繁瑣的策略。
從基因分離克隆的方法進行分類可分為三類:一種類型是功能克隆,即根據已知基因的產物推斷出其相應核苷酸序列,再根據此序列合成寡聚核苷酸探針。從cDNA文庫或基因組文庫中調取目的基因。第二種類型是表型克隆。是近年來發展十分迅速的一類方法,例如差異篩選法、差減雜交(SH)、mRNA差別顯示技術(DDRT-PCR)、代表性差異分析(RAD)抑制型差減雜交(SSH)等。第三類是無基因序列及表達功能信息,但具有基因遺傳圖,轉座子標簽等條件,常用圖位克隆和轉座子標簽法克隆。

 

 

 
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