a国产亚洲欧美精品一区在线观看_看一级黄色毛片_在线观看播放_一级片精品_国产精成人品日日拍夜夜免费_草久在线视频

VIP標(biāo)識(shí) 上網(wǎng)做生意,首選VIP會(huì)員| 設(shè)為首頁(yè)| 加入桌面| | 手機(jī)版| RSS訂閱
食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號(hào)
 

重組質(zhì)粒中目的基因的分離與純化

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-02
先取少量純化的重組質(zhì)粒,用限制性內(nèi)切酶切出目的基因,經(jīng)電泳分離,確認(rèn)。以200μl含2mg DNA(重組質(zhì)粒)為例:取10μl含100μg DNA,加90μl TE。按1μg DNA加2-5U限制性內(nèi)切酶,1/10體積緩沖液,1-2小時(shí)保溫。緩沖液種類和酶反應(yīng)溫度因內(nèi)切酶種類而異。1/10體積3mol/l NaAc,2倍無水乙醇,-70℃,2小時(shí)(-20℃過夜),10000rpm,10分鐘離心,棄上清液(乙醇沉淀)。適量TE溶解沉淀(切斷的DNA質(zhì)粒與目的基因混合物),電泳分離(用相應(yīng)分子量DNA標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)電泳),在紫外光下觀察結(jié)果,與標(biāo)準(zhǔn)DNA分子量比較,確認(rèn)目的基因和內(nèi)切酶的切割效果。
  經(jīng)電泳確認(rèn)后,取適量DNA(重組質(zhì)粒)同上條件切開,用1.5%低熔點(diǎn)(<65℃熔解)瓊脂糖凝膠,電泳分離。在紫外光下,切出含目的基因區(qū)帶(凝膠),放入離心管中,提取純化。
  從低熔點(diǎn)凝膠提取,純化DNA片段。加與凝膠體積相等的TE(10mmol/l Tris-HCl pH8.0,0.1mmol/l EDTA),置65℃水浴5分鐘保溫,使凝膠完全溶解。待放至室溫,加等量酚(TE飽和,TE封在上層,取下層酚),輕輕混勻(不用混勻),12000rpm,3分鐘離心。反復(fù)1-2次。取上層液,加0.1體積3mol/L醋酸鈉(pH5.2)和2.5倍體積無水乙醇,進(jìn)行乙醇沉淀。將純化的DNA加適量TE溶解,測(cè)定含量,備用(可用于目的基因結(jié)構(gòu)分析,探針制備等)。除低熔點(diǎn)凝膠回收法外,如用一般凝膠可用透析帶短暫電泳,離心管低部加玻璃棉,高速離心等方法回收DNA片段。
 
[ 網(wǎng)刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關(guān)閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點(diǎn)擊排行
 
 
Processed in 0.612 second(s), 191 queries, Memory 1.35 M
主站蜘蛛池模板: 亚洲欧美成人网 | 国产亚洲精品线观看动态图 | 午夜激情成人网 | 久久精品无码一区二区三区不卡 | 蜜臀99久久精品久久久久小说 | 成人免费视频www在线观看我 | 中文原创av | 精品视频国产亚洲 | 国产日韩欧美一区 | 亚洲а∨天堂久久精品喷水 | 热RE99久久6国产精品免费 | 色精品视频 | 日韩欧美一区二区在线观看视频 | 日本不卡一二三区 | 一级草逼片 | 美女扒开尿眼让男人桶爽视频 | 91精产国品一二三区 | 久久久久亚洲国产 | 日本精品黄色 | 久久人人九九 | 国产麻豆一区二区三区 | 精品h视频 | 亚洲第一欧美 | 国产一区二区三区久久久久久久 | 无码夫の前で人妻を犯す中字 | 国产寡妇XXXX猛交巴巴 | 99精品在线免费视频 | 无人区乱码一区二区三区 | 他掀开裙子舌头伸进去在线观看 | 特级片日本| 麻豆啪啪 | 欧美精品少妇裸体啪啪裸体 | 日韩中文字幕av | 成全动漫在线观看免费观看 | 国产精品免费久久久久影院 | 锵锵锵锵锵免费完整观看动漫最新章节 | 天天摸天天操天天舔 | 国产午夜免费福利 | 亚洲国产成人片在线观看 | 五月网址 | 日韩免费一区二区三区在线播放 |