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影響電泳遷移率的因素

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-02

  ⒈電場強度 電場強度是指單位長度(cm)的電位降,也稱電勢梯度。如以濾紙作支持物,其兩端浸入到電極液中,電極液與濾紙交界面的紙長為20cm,測得的電位降為200V,那么電場強度為200V/20cm=10V/cm。當(dāng)電壓在500V以下,電場強度在2-10v/cm時為常壓電泳。電壓在500V以上,電場強度在20-200V/cm時為高壓電泳。電場強度大,帶電質(zhì)點的遷移率加速,因此省時,但因產(chǎn)生大量熱量,應(yīng)配備冷卻裝置以維持恒溫。

  ⒉溶液的pH值 溶液的pH決定被分離物質(zhì)的解離程度和質(zhì)點的帶電性質(zhì)及所帶凈電荷量。例如蛋白質(zhì)分子,它是既有酸性基團(-COOH),又有堿性基團(-NH2)的兩性電解質(zhì),在某一溶液中所帶正負(fù)電荷相等,即分子的凈電荷等于零,此時,蛋白質(zhì)在電場中不再移動,溶液的這一pH值為該蛋白質(zhì)的等電點(isoelctric point,pI)。若溶液pH處于等電點酸側(cè),即pH<pl,則蛋白質(zhì)帶正電荷,在電場中向負(fù)極移動。若溶液pH處于等電點堿側(cè),即pH>pl,則蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷,向正極移動。溶液的pH離pl越遠(yuǎn),質(zhì)點所帶凈電荷越多,電泳遷移率越大。因此在電泳時,應(yīng)根據(jù)樣品性質(zhì),選擇合適的pH值緩沖液。

  ⒊溶液的離子強度 電泳液中的離子濃度增加時會引起質(zhì)點遷移率的降低。其原因是帶電質(zhì)點吸引相反符合的離子聚集其周圍,形成一個與運動質(zhì)點符合相反的離子氛(ionic atmosphere),離子氛不僅降低質(zhì)點的帶電量,同時增加質(zhì)點前移的阻力,甚至使其不能泳動。然而離子濃度過低,會降低緩沖液的總濃度及緩沖容量,不易維持溶液的pH值,影響質(zhì)點的帶電量,改變泳動速度。離子的這種障礙效應(yīng)與其濃度和價數(shù)相關(guān)。可用離子強度I表示。

  ⒋電滲 在電場作用下液體對于固體支持物的相對移動稱為電滲(electro-osmosis)。其產(chǎn)生的原因是固體支持物多孔,且?guī)в锌山怆x的化學(xué)基團,因此常吸附溶液中的正離子或負(fù)離子,使溶液相對帶負(fù)電或正電。如以濾紙作支持物時,紙上纖維素吸附OH-帶負(fù)電荷,與紙接觸的水溶液因產(chǎn)生H3O ,帶正電荷移向負(fù)極,若質(zhì)點原來在電場中移向負(fù)極,結(jié)果質(zhì)點的表現(xiàn)速度比其固有速度要快,若質(zhì)點原來移向正極,表現(xiàn)速度比其固有速度要慢,可見應(yīng)盡可能選擇低電滲作用的支持物以減少電滲的影響。

 
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